IP: Dr. Eladio A. Velasco Sampedro

Resumen del proyecto: Los dos principales genes responsables de cñancer de mama/ovario hereditario (CMOH), BRCA1 y BRCA2, presentan un elevado número de variantes de ADN de significado clínico incierto. La correlación entre alteraciones de los patrones de splicing por mutaciones en elementos reguladores de splicing /SREs) y enfermedad genética ha tomado especial relevancia en biomedicina. El objetivo central de este proyecto es desvelar el papel de las alteraciones del splicing en la etiopatogenia del CMOH.
Objetivos: i) Mapeo bioinformático de SREs de BRCA1/2 y efecto predecible de las mutaciones; ii) Construcción de minigenes wild type de los exones de BRCA1/2; iii) splicing y susceptibilidad genética a CMOH: ensayos funcionales y efecto de las mutaciones de SREs en el procesamiento de BRCA1/2; iv) Papel de los factores de splicing (proteínas SR y hnRNP) en la regulación de cada exón; v) Caracterización del mecanismo regulador de los pseudoexones crípticos de BRCA1/2; vi) Análisis de los patrones globales de splicing en pacientes BRCA negativos mediante microarrays.
Metodología: Las pacientes CMOH proceden de la Unidad de Consejo Genético de Burgos, y se extraerán datos de las 3500 mutaciones registradas en la base de datos pública (BIC). Los exones y mutaciones se analizarán con los programas de splicing NNSPLICE, ESEfinder y ESRsearch. Los ensayos funcionales de splicing se realizarán mediante minigenes híbridos, mutagénesis dirigida y transfección en células HeLa y MCF10A. Co-transfección con siRNAs (silenciamiento) y vectores de sobreexpresión de factores de splicing. El análisis global de los perfiles de splicing se realizará con microarrays Exon 1.0ST humanos y el software Partek Genomics Suite.

Entidad financiadora: Instituto de Salud Carlos III